產(chǎn)品概述
細(xì)胞凋亡是指為維持有機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。正常情況下任何細(xì)胞在形成過程中發(fā)生的異常都會通過凋亡消除。例如體內(nèi)的癌細(xì)胞增長為腫瘤的過程會受細(xì)胞凋亡的引導(dǎo)而被抑制。然而在抑癌基因p53出現(xiàn)問題時，凋亡就不會誘導(dǎo)發(fā)生，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞的不斷增長。細(xì)胞凋亡可以通過細(xì)胞形態(tài)的變化或生物化學(xué)的變化來檢測。目前常用的指標(biāo)有caspase活性變化、DNA碎片、磷脂酰絲氨酸的外翻等。
原理
Annexin V染色的細(xì)胞可以用于檢測細(xì)胞凋亡早期的細(xì)胞膜變化。在細(xì)胞凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜特異性結(jié)合，因此Annexin V 被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。用綠色熒光FITC標(biāo)記的Annexin V通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可以檢測到細(xì)胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 是一種核酸染料，PI只能透過凋亡晚期和死細(xì)胞的細(xì)胞膜，因此Annexin V和PI結(jié)合使用，可以區(qū)分凋亡早晚期的細(xì)胞及死細(xì)胞。
Normal Cell Early stages of apoptosis Late stages of apoptosis
熒光參數(shù)
-流式細(xì)胞儀檢測
1. 加樣到流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex = 488 nm；發(fā)射波長Em = 530 nm。
2. Annexin V-FITC的綠色熒光通過FITC通道 (FL1) 檢測；PI的紅色熒光通過PI 通道 (FL2或FL3) 檢測 (建議使用FL3)。
-熒光顯微鏡檢測
將細(xì)胞懸液滴到玻片上，置于顯微鏡上使用合適的濾光片檢測。* 由于EDTA會對細(xì)胞膜的特定部位有損傷，建議使用不含EDTA的胰酶消化貼壁細(xì)胞。
相關(guān)資料
所需的設(shè)備和材料
- 樣品和誘導(dǎo)劑
- PBS、超純水
- 合適量程的移液器
- 細(xì)胞培養(yǎng)用6，12，24，96孔板
- 流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡。
* 最大激發(fā)/發(fā)射波長 Annexin V, FITC: 494 nm/518 nm；PI: 535 nm/617 nm
溶液制備
1×Annexin V Binding solution：將10×Annexin V Binding Buffer用超純水稀釋10倍。
穩(wěn)定性
試劑盒在0-5℃下可以保存6個月，請避光保存Annexin V, FITC結(jié)合物。
