一、 實(shí)驗(yàn)原理
繼分析DNA的Southern雜交方法出現(xiàn)后，1977年Alwine等人提出一種與此相類似的、用于分析細(xì)胞總RNA或含poly A尾的RNA樣品中特定mRNA分子大小和豐度的分子雜交技術(shù)，這就是與Southern相對應(yīng)而定名的Northern雜交技術(shù)。這一技術(shù)自出現(xiàn)以來，已得到廣泛應(yīng)用，成為分析mRNA最為常用的經(jīng)典方法。
與Southern雜交相似，Northern雜交也采用瓊脂糖凝膠電泳，將分子量大小不同的RNA分離開來，隨后將其原位轉(zhuǎn)移至固相支持物（如尼龍膜、硝酸纖維膜等）上，再用放射性（或非放射性）標(biāo)記的DNA或RNA探針，依據(jù)其同源性進(jìn)行雜交，最后進(jìn)行放射自顯影（或化學(xué)顯影），以目標(biāo)RNA所在位置表示其分子量的大小，而其顯影強(qiáng)度則可提示目標(biāo)RNA在所測樣品中的相對含量（即目標(biāo)RNA的豐度）。但與Soughern雜交不同的是，總RNA不需要進(jìn)行酶切，即是以各個RNA分子的形式存在，可直接應(yīng)用于電泳；此外，由于堿性溶液可使RNA水解，因此不進(jìn)行堿變性，而是采用甲醛等進(jìn)行變性電泳。雖然Northern也可檢測目標(biāo)mRNA分子的大小，但更多的是用于檢測目的基因在組織細(xì)胞中有無表達(dá)及表達(dá)的水平如何。
二、應(yīng)用簡介
1、定性及定量分析基因轉(zhuǎn)錄水平差異；
2、檢測目的基因是否具有可變剪切產(chǎn)物或者重復(fù)序列。
三、 實(shí)驗(yàn)方法
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
1．為了抑制RNA酶的活性，所有用于Northern印跡的溶液，均須用經(jīng)DEPC處理過的無菌去離子水配制。DEPC是一種致癌劑，須小心操作。尤其在用DEPC處理乙酸銨時，因?yàn)镈EPC能與銨離子反應(yīng)產(chǎn)生氨基甲酸乙酯（一種潛在的致癌劑），故在以DEPC處理乙酸銨時，更須分外小心。
2．RNA極易被環(huán)境中存在的RNA酶降解，因此須特別警惕RNA酶的污染。操作時必須仔細(xì)、小心，嚴(yán)格按同位素操作規(guī)程進(jìn)行，以防止同位素污染。
3． 必要時，可采用Sephades G-50柱層析法純化標(biāo)記的探針，以去除標(biāo)記反應(yīng)中未結(jié)合的（游離的）核苷酸。
3． 膜的重復(fù)使用：結(jié)合了待測RNA的膜與探針雜交后，可經(jīng)堿或熱變性方法將探針洗脫，膜可反復(fù)使用與其它探針雜交。方法如下：雜交的膜（注意：雜交過的膜在保存過程中不能干燥，否則探針將會與膜形成不可逆的結(jié)合）置100℃ 0.5% SDS中煮沸3min，自然冷卻至室溫后，將膜放入雙蒸水中漂洗2-3遍。取出膜，用濾紙吸去膜表面的水份。將膜直接進(jìn)行另一種探針的雜交或用保鮮膜包好，室溫下真空保存。
七、服務(wù)流程
病理學(xué)檢測
分子生物學(xué)檢測
免疫學(xué)檢測服務(wù)
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)
動物實(shí)驗(yàn)平臺
