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免疫熒光

一、實驗原理

免疫熒光(IF),是應用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過熒光標記抗體對組織細胞內(nèi)抗原進行定位、定性及定量的研究。

免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性,所以當抗原抗體發(fā)生反應時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應的抗原(或抗體)結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應。


二、應用簡介

目前主要可以對石蠟切片、冰凍切片、細胞爬片、組織芯片進行免疫熒光檢測。

免疫熒光技術可用于:(1)研究特異蛋白抗原在細胞內(nèi)分布;(2)對抗原進行細胞定位;(3)對特定抗原進行定量檢測


三、實驗方法


四、樣本送檢要求


五、案例展示



六、常見問題

1、無/弱染色

烤片溫度過高,推薦56℃-60℃1-2h;
    一抗是否適用固定液和石蠟切片,使用濃度是否過低,孵育是否時間過短等。

2、非特異性背景染色

是否滅活內(nèi)源性過氧化物酶;
     孵育過程中干片;
     抗原熱修復過度。

3、染色過深

一抗?jié)舛冗^高;
     染色試濃度過高或孵育時間過長;
     染色劑濃度過高或孵育時間過長。

 


七、服務流程

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