一、實驗原理
將動物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置于合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。
原代細(xì)胞保留了很多來源組織的重要生理特性，能高度模仿體內(nèi)的情況，且沒有遺傳和化學(xué)的改變。因此，原代細(xì)胞成為許多研究中理想的細(xì)胞模型。
二、應(yīng)用簡介
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。通過原代分離獲得的細(xì)胞具有與體內(nèi)細(xì)胞相似的生物學(xué)特征，是研究生物體相關(guān)生命活動的理想材料。
三、實驗方法
（一）懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
（二）實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
（三）小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)
1、取肝臟：將小鼠斷頸致死，取肝臟；
2、除雜物：剔除脂肪、結(jié)締組織、血液等雜物；
3、研磨肝臟：用手術(shù)剪將臟器剪成小塊并研磨；
4、胰酶消化：加入胰酶消化，使細(xì)胞分離；
5、濾網(wǎng)去雜：用濾網(wǎng)過濾，除去大組織塊；
6、細(xì)胞計數(shù)：血球計數(shù)板計數(shù)。
四、 樣本送檢要求
五、案例展示
六、 常見問題
（1）原代培養(yǎng)材料的選擇，盡量選取繁殖能力較強(qiáng)的組織，如胚胎、幼小的生物體或者腫瘤組織等。
（2）要注意無菌操作。其操作要求應(yīng)高于外科手術(shù)、
（3）整個取材操作要迅速，時間不能過長，以確保胚胎細(xì)胞活性。
（4）運(yùn)用消化法時胰酶溫度應(yīng)低于37℃，濃度只需平時消化細(xì)胞濃度的一半。因為此過程不像消化培養(yǎng)細(xì)胞時的1~10min，而是至少20min，先消化下來的細(xì)胞在此胰酶消化液中繼續(xù)消化了10min以上。所以胰酶不能作用過強(qiáng)，否則這些細(xì)胞易被損傷而不易生存。
（5）如使用組織塊法，則應(yīng)待組織塊略干燥，能黏附于瓶壁時再使之與培養(yǎng)液接觸，匆使組織塊漂浮起來。如果組織塊沒有黏壁，則細(xì)胞不易生長，即使生長也因沒有貼在瓶壁上，從而因不能觀察到而無法收集到生長的細(xì)胞。
（6）原代培養(yǎng)操作時，也可以使用未添加血清的DMEM或PBS洗滌子宮、胚胎或組織塊等。
七、 服務(wù)流程
病理學(xué)檢測
分子生物學(xué)檢測
免疫學(xué)檢測服務(wù)
細(xì)胞實驗服務(wù)
動物實驗平臺
