一、 實驗原理
蘇木精—伊紅染色法( hematoxylin-eosin staining )，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。
蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。
①細胞核染色原理
蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。
②細胞漿染色原理
細胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系，當(dāng)pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或堿性染料不易染色。當(dāng)pH調(diào)到6.7-6.8時，大于蛋白質(zhì)的等電點pH值，表現(xiàn)酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現(xiàn)時胞核也被染色，核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結(jié)締組織，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。
③分化作用
染色后，用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu)，使組織與色素分離而褪色。經(jīng)蘇木精染色后，必須用0.5%鹽酸乙醇分化，使細胞核過多結(jié)合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去，在進行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。因此，在HE染色中分化是極為關(guān)鍵的一步。
④返藍作用
分化之后，蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色，在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài)，呈藍色。組織切片經(jīng)0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而終止分化，再用弱堿性水（0.2%氨水）使蘇木精染上的細胞核呈現(xiàn)藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍，但所需時間較長。
二、應(yīng)用簡介
HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。常用于組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察。
三、實驗方法
四、樣本送檢要求
五、 案例展示
六、 常見問題
1.切片染色不勻
1.1組織取材固定不當(dāng)。
如組織取材過大或過厚，不能將組織完全固定，組織切片染色后出現(xiàn)外周固定好的部分易著色，而中間未固定好的組織，細胞著色模糊，使染色不均。在送檢的標本中，及時用4%中性甲醛對標本固定，固定液應(yīng)是標本的4倍。大標本應(yīng)切開固定。
1.2切片薄厚不均或有橫紋。
切片刀有缺口時，易造成斷裂，破碎和不完整。切片刀傾角過大上卷，不能連在一起，過小則切片皺起。或因螺絲松動產(chǎn)生振動切片易造成厚薄不均或技術(shù)人員手臂搖動切片機頭力量不均易造成橫紋。切片時檢查切片機螺母是否擰緊。
切片刀角度是否過大或過小即可。
1.3組織脫水，透明和浸臘處理不當(dāng)
（1）組織脫水用的各級乙醇未能保證相應(yīng)濃度使組織脫水不徹底
（2）二甲苯內(nèi)的時間過長組織易碎也無法切出好片子。
（3）浸臘溫度過高，組織變脆也不利切片染色。
1.4染色過程處理不當(dāng)
（1）組織切片脫臘不徹底，如二甲苯時間過久 ，無水乙醇不純或時間過久，室溫低，組織切片上的石蠟沒有全部除掉時，含臘部分不著色或著色過淺染色液試劑量少，組織切片沒有全部浸到 。
（2）組織切片上在撈片時有氣泡，則氣泡內(nèi)組織可能染色不均。
2.切片染色模糊不清
2.1取材：
組織標本已發(fā)生自溶或取材后沒及時固定或固定液濃度不夠；另固定前干枯標本，染色后易出現(xiàn)灰染現(xiàn)象，很難補救。
2.2固定
（1）固定劑對組織有一定媒染作用，它既可與蛋白結(jié)合又能與染料結(jié)合，可增強著色能力，同時能沉淀和凝固細胞內(nèi)成分，使細胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同折光率造成光學(xué)差異。故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因
（2）在日常病理制片中淋巴結(jié)處理不當(dāng)造成切片染色后組織見發(fā)灰現(xiàn)象，其主要原因由于細胞密集，結(jié)構(gòu)復(fù)雜導(dǎo)致固定液難以滲透到組織深部，從而造成組織中央固定不佳，而出現(xiàn)徹底發(fā)灰現(xiàn)象?？捎玫攘繜o水乙醇乙醚混合液處理切片5-10分鐘，乙醇洗，水洗，3%硫酸鐵銨溶液補充媒染5分鐘既可。
（3）送檢標本部分用乙醇固定組織，常溫下乙醇的白蛋白，球蛋白不再溶于水，而核蛋白則可溶于水。故乙醇固定標本切片，切片染色不良，細胞質(zhì)染色較差。切片出現(xiàn)模糊不清現(xiàn)象，其補救辦法液4%中性甲醛對標本再固定。
3.其他原因
3.1溫度：
包埋/切片后烤片溫度過高，均會使蛋白發(fā)生質(zhì)變可能發(fā)生拒染，造成切片染色模糊不清。
3.2染料：
質(zhì)量差或溶液配制不當(dāng)，如配制蘇木精時加熱使氧化過度，不能生成三氧化蘇木紅生成四氧化蘇木紅使染液沒有染色能力或蘇木精使用時間過久，導(dǎo)致切片著色能力或蘇木精使用時間過久，導(dǎo)致切片著色不良，切片模糊不清。
3.3分化過度 細胞核著色淡
3.4脫水
透明不徹底：切片如在二甲苯中有白霧現(xiàn)象發(fā)生即表示乙醇脫水未盡，應(yīng)立即返回重新脫水。否則，鏡下組織結(jié)構(gòu)模糊不清。
3.5封固
（1）注意避免封片者口鼻呼出氣接觸組織上封劑。
因呼出氣體中會含水分；
（2）在潮濕環(huán)境中動作要快，以免空氣水進入封固內(nèi)響質(zhì)量。
七、服務(wù)流程
病理學(xué)檢測
分子生物學(xué)檢測
免疫學(xué)檢測服務(wù)
細胞實驗服務(wù)
動物實驗平臺
