一、 實驗原理
細(xì)胞增殖是細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下，通過DNA復(fù)制 、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等一系列復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行的分裂過程，是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。細(xì)胞增殖檢測廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤生物學(xué)、藥理學(xué)等研究領(lǐng)域，是評價細(xì)胞代謝、生理和病理狀況的重要方法。目前，常用的方法包括胸腺嘧啶核苷滲入法 、MTT檢測法、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂 （CFSE）檢測法等。但最直接精確的就是利用胸腺嘧啶核苷酸類似物檢測新合成的DNA，即５‐乙炔基‐２′脫氧尿嘧啶核苷（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，EdU）和 ５‐溴‐２′‐脫氧尿嘧啶核苷（５‐bromo‐２′‐deoxyuridine，BrdU）標(biāo)記。
BrdU是另一種嘧啶類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點是溴替代了胸腺嘧啶環(huán)與5位C原子連接的甲基，可競爭性摻入到S期新合成的DNA中，利用免疫熒光技術(shù)標(biāo)記增殖細(xì)胞，如同時結(jié)合其他細(xì)胞標(biāo)記物進(jìn)行雙重染色，可判斷細(xì)胞種類及增值速度，對研究細(xì)胞動力學(xué)有重要意義。
EdU是一種胸腺嘧啶核苷的類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與５位C原子相連的甲基被乙炔基取代，在S期細(xì)胞增殖時可作為底物摻入到正在復(fù)制的DNA鏈中， 通過與染料的共軛反應(yīng)可以進(jìn)行高效快速的細(xì)胞增殖檢測，其中，乙炔基能夠與一種熒光標(biāo)記的小分子疊氮化合物探針反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)是一種被稱“click”化學(xué)作用的Cu＋催化的環(huán)加成作用。EdU的［3+2］環(huán)加成 作用由Cu＋催化完成，由于Cu＋鹽的低溶解度，Cu＋通常以配基的形式引入到［3+2］環(huán)加成作用之中。
二、應(yīng)用簡介
目前，BrdU標(biāo)記新合成DNA的方法在動物細(xì)胞組織的腫瘤生物學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。
與傳統(tǒng)的免疫熒光染色比較，EdU反應(yīng)非常快速，能在幾分鐘內(nèi)完成，且不需要進(jìn)行DNA變性處理，只需簡單的幾個步驟，使得組織成像更簡單易行，因此也適用于高通量篩選試驗，尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。
三、實驗方法
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
1、BrdU配制方法：10mg容于10ml雙蒸水，4℃避光保存。
2、BrdU會對肌體造成不可逆損傷，使用時注意安全，避免吸入BrdU粉塵。
七、服務(wù)流程
病理學(xué)檢測
分子生物學(xué)檢測
免疫學(xué)檢測服務(wù)
細(xì)胞實驗服務(wù)
動物實驗平臺
