中國(guó)自主創(chuàng)新企業(yè)
3A質(zhì)量服務(wù)誠(chéng)信企業(yè)
3A質(zhì)量服務(wù)誠(chéng)信企業(yè)
國(guó)家級(jí)科技企業(yè)孵化器
重點(diǎn)培育項(xiàng)目
重點(diǎn)培育項(xiàng)目
性能簡(jiǎn)介
Cell Counting Kit-8是用于化學(xué)藥物等對(duì)細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的試劑盒。試劑盒中使用高靈敏度的新型水溶性四唑鹽WST-8甲臜染料作為顯色底物，與傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒相比，靈敏度大幅度的提高。WST-8被細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原產(chǎn)生水溶性的甲臜染料。通過(guò)直接測(cè)量甲臜染料（450 nm）的吸光度，即可測(cè)出活細(xì)胞的數(shù)量。細(xì)胞數(shù)量與甲臜染料成正比關(guān)系。同時(shí)試劑盒為配置好的1瓶溶液，易于使用。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1）對(duì)比[3H]法，無(wú)需放射性同位素。
2）使用水溶性四唑鹽與水溶性甲臜染料，因此無(wú)需DMSO換液操作步驟。（如MTT分析等需要）
3）與其他水溶性四唑鹽法（XTT，MTS）相比，靈敏度更高的同時(shí)毒性更低。
4）試劑盒為1瓶裝，無(wú)需提前配置，無(wú)需準(zhǔn)備其他試劑。
5）試劑盒穩(wěn)定性高。
6）試劑可以與酚紅同時(shí)使用。
原理
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 包含了Dojindo開(kāi)發(fā)的水溶性四唑鹽—WST?-8和電子載體(1-Methoxy PMS)。由于WST?-8具有高水溶性，它存在于細(xì)胞外而不滲透活細(xì)胞膜，通過(guò)1-Methoxy PMS接受乳酸脫氫酶的輔酶NADH的電子而被還原，生成水溶性WST?-8甲臜染料（最大吸收波長(zhǎng)450nm：詳見(jiàn)下方吸收光譜）。
產(chǎn)品概述
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 利用了Dojindo開(kāi)發(fā)的水溶性四唑鹽—WST?-8 (2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯 基) -5- (2,4-二磺基苯) -2H-四唑單鈉鹽)，它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的橙黃色甲臜。 CCK-8溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，無(wú)需配制。CCK-8法是用于測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的 一種高靈敏度，無(wú)放射性的比色檢測(cè)法。WST?-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶氧化還原后生成的橙黃色甲臜能夠溶解在培養(yǎng)基中 ，生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。
操作步驟
本試劑盒測(cè)定方法簡(jiǎn)單，只需一瓶試劑即可操作，無(wú)需二次配制工作液，從而提高實(shí)驗(yàn)者的效率。
CCK-8使用例
細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(左)與細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)(右)
CCK-8與LDH
Cell Counting Kit-8 與Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞毒性
檢測(cè)藥物： Mitomycin C
細(xì)胞: HeLa
培養(yǎng)基: MEM, 10% FBS
孵育條件: 37℃, 5% CO2, 48小時(shí)
檢測(cè)波長(zhǎng): Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST? (490 nm)
使用Mitomycin C 檢測(cè)檢測(cè)HeLa細(xì)胞毒性。通過(guò)使用Cell Counting Kit-8和Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST? [貨號(hào): CK12]兩種方法檢測(cè)。Cell Counting Kit-8以細(xì)胞活性為指標(biāo)，Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST以游離的LDH為指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)兩種指標(biāo)檢測(cè)存在差異性。二者聯(lián)用，能更全面的表征細(xì)胞毒性。
WST?-8甲臜染料
WST?-8甲臜染料吸光度與續(xù)細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系
培養(yǎng)基: MEM, 10%FBS(HeLa ) , RPM1640(HL60)
孵育條件:37℃, 5%CO2, 2hr (HeLa、HL60)
檢測(cè)試劑:Cell Counting Kit-8
(●) 450 nm, XTT (◆) 450 nm, MTS
(▲) 490 nm, MTT(■) 570 nm
將HeLa細(xì)胞和HL60細(xì)胞以不同的細(xì)胞數(shù)接種到96孔板中，按孵育條件處理后加入以上每種試劑測(cè)定吸光度。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量增加吸光度。CCK-8靈敏度、線性范圍優(yōu)于以上其他方法。
試劑穩(wěn)定性比較
Cell Counting Kit-8可冷藏保存1年以上，避免試劑浪費(fèi)！
試劑毒性評(píng)價(jià)
試劑本身對(duì)細(xì)胞毒性的比較
HeLa細(xì)胞在96孔板中孵育(5000個(gè)/孔)。在CO2培養(yǎng)箱中開(kāi)始顯色反應(yīng)，每隔3、6、24小時(shí)在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。Cell Counting Kit-8在24小時(shí)后細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有改變。在使用藥物進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)選擇測(cè)量試劑本身對(duì)細(xì)胞毒性影響更小的試劑。
3D培養(yǎng)檢測(cè)
3D培養(yǎng)檢測(cè)細(xì)胞毒性指南，
詳見(jiàn)OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4 Test No. 492
