中國(guó)自主創(chuàng)新企業(yè)
3A質(zhì)量服務(wù)誠(chéng)信企業(yè)
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國(guó)家級(jí)科技企業(yè)孵化器
重點(diǎn)培育項(xiàng)目
重點(diǎn)培育項(xiàng)目
產(chǎn)品概述
DNA含量分析在流式細(xì)胞檢測(cè)中，占有相當(dāng)大的比例。通過(guò)這種方法，研究者可以進(jìn)行抗癌藥物的毒性評(píng)估，并對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的預(yù)后效果及進(jìn)展程度進(jìn)行分析。在細(xì)胞周期檢測(cè)中，DNA含量也同樣作為重要的分析手段而被廣泛應(yīng)用。通過(guò)細(xì)胞DNA含量的測(cè)定，可計(jì)算各細(xì)胞周期的百分率，也可通過(guò)DNA片段化檢測(cè)、DNA雙染標(biāo)記等方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
Cell Cycle Assay Kit-PI/RNase Staining試劑盒，可快速完成細(xì)胞周期的分析，操作簡(jiǎn)便。本產(chǎn)品使用碘化丙啶 (PI) 作為DNA熒光染料，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)得到細(xì)胞周期中G0/G1，G2和S期細(xì)胞的比例。
所需的設(shè)備和材料
- 流式細(xì)胞儀（碘化丙啶PI:λex=535 nm，λem=617 nm）
- 37℃培養(yǎng)箱
- PBS緩沖液
- 1.5 ml微量管
- 100-1000 μl、20-200 μl、2-20 μl移液器
溶液制備
本產(chǎn)品在固定細(xì)胞及不細(xì)胞固定的情況下皆可使用。
配置Working solution (1 sample)
取500 μl Assay Buffer 后，分別加入25 μl PI Solution和2.5 μl RNase Solution。
＊工作液易遇光分解，請(qǐng)?jiān)谑褂们傲⒓磁渲貌⒂娩X箔紙包裹避光保存。
配置好的工作液1天內(nèi)用完。
基本操作
非固定細(xì)胞
1. 將細(xì)胞密度調(diào)整為1-5×106cells/ml a)。
2. 取1 ml的細(xì)胞懸液加入到1.5 ml微型管中，在1,000×g離心3 min b)。
3. 去除上清液后加入1 ml PBS緩沖液清洗細(xì)胞，在1,000×g離心3 min。
4. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。
5. 在4℃避光培養(yǎng)30 min。
6. 渦旋振蕩使細(xì)胞分散，在37℃避光培養(yǎng)30 min。
7. 渦旋振蕩使細(xì)胞分散，用尼龍篩網(wǎng)過(guò)濾，以去除樣品中的細(xì)胞團(tuán)塊 c)。
8. 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
a) 貼壁細(xì)胞用胰蛋白酶-EDTA消化細(xì)胞后，用PBS洗滌并離心收集細(xì)胞。
b) 根據(jù)不同的細(xì)胞種類，需適當(dāng)調(diào)整轉(zhuǎn)速與離心時(shí)間。
c) 樣品處理后，剩余部分無(wú)法繼續(xù)保存并使用。
固定細(xì)胞
1. 將細(xì)胞密度調(diào)整為1-5×106cells/ml a)。
2. 取1 ml的細(xì)胞懸液加入到1.5 ml微型管中，在1,000×g 離心3 min。
3. 去除上清，并在細(xì)胞團(tuán)中加入1 ml的-20℃保存的70%乙醇。
4. 渦旋振蕩使細(xì)胞分散，在4℃下靜置2 h b)。
5. 在1,000×g 離心3 min后，去除乙醇 c)。
6. 加入1 ml PBS緩沖液清洗細(xì)胞，在1,000×g 離心3 min。
7. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。
8. 渦旋振蕩使細(xì)胞分散，在37℃避光培養(yǎng)30 min。
9. 渦旋振蕩使細(xì)胞分散，在4℃避光培養(yǎng)30 min。
10. 渦旋振蕩使細(xì)胞分散，用尼龍篩網(wǎng)過(guò)濾，以去除樣品中的細(xì)胞團(tuán)塊 d)。
11. 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
a) 貼壁細(xì)胞用胰蛋白酶-EDTA消化細(xì)胞后，用PBS洗滌并離心收集細(xì)胞。
b) 根據(jù)不同的細(xì)胞種類，需適當(dāng)調(diào)整固定時(shí)間。
c) 根據(jù)不同的細(xì)胞種類，需適當(dāng)調(diào)整轉(zhuǎn)速與離心時(shí)間。
d) 樣品處理后可以在4℃以下保存并繼續(xù)使用，但是保存時(shí)間長(zhǎng)短與細(xì)胞種類有關(guān)。
